本发明属于木材胶黏剂技术领域，具体涉及一种生物质原料室温固化胶黏剂的制备方法。所述胶黏剂原料包括以下组分：按重量份计，植物原料4001000份、活菌发酵液4001200份、交联剂60220份、水1000份。其制备方法具体利用环境微生物制备活菌发酵液；将活菌发酵液与植物蛋白粉混合，再经过灭菌，制备成胶黏剂。本发明该胶黏剂固含量高，活性官能团多，特别是羧基含量高，可室温固化；固化后耐水性好，无甲醛等有毒有害物质释放，可环境降解；可用于家具板材拼接、接头组装，胶合木、胶合板等人造板制造。